银耳菌种分离技术
2016-08-17 17:53:38 来源： 点击：
银耳、又名白木耳、雪耳，是我国久负盛名的山珍菌类。隶属与担子菌纲，银耳目，银耳科，银耳属。银耳是著名的食用兼药用菌，营养十分丰富。因而具有较高的药用价值，还含有多种人体必需氨基酸。随着食用菌产业的不断发展壮大，银耳的生产现已成为某些地区的大部分农民主要经济来源之一。菌种，好比农作物的种子，是食用菌生产的根本，其优劣直接影响着食用菌的产量和质量。人工培育的菌种有母种、原种和栽培种之分，母种是用孢子分离或组织分离培育而成的菌丝体，把母种扩大到木屑、棉仔壳等为主的培养料上的菌种称为原种，由原种扩大培养成为生产上使用的菌种称为栽培种。银耳生活史较复杂， 银耳纯菌丝的制得与保存日前仍相当困难。将银耳纯菌丝接种在普通PDA培养基上，菌丝生长缓慢，且易向节孢子转变，菌丝易变黄、胶质化。银耳纯菌丝没有分解木质纤维素的能 力，只有当银耳菌丝与耳友菌丝(又称香灰菌，子囊菌亚门的一种真菌)生活在一起才能发育结耳。为克服传统银耳菌种培育方法培育出的菌种容易退化、生长不稳定且银耳产量不高的缺陷，通过挑选出生长强壮优良的银耳孢子所萌发的菌丝与生长有力的香灰菌丝进行交合培育，从而培育出抵抗力强、不易退化、生长稳定、产量高的银耳菌种。然而对进行交合选取的银耳菌丝和香灰菌丝的菌丝特征以及交合比例缺乏把握，导致培育出的银耳菌种重复性不高。
1、银耳纯白菌丝的提取
第一步是分离材料的选取从袋栽银耳栽培房中，选取子实体形态为牡丹花形、耳片肥厚、色泽鲜白、无病虫害感染的理想耳朵，置于显微镜下观察并认真鉴定后，选为分离材料；
第二步是将分离材料用无菌水多次漂洗后吸干水分；
第三步是培养将分离材料接种至木屑培养基上(木屑培养基由木屑75%、麦片20%、石膏粉5%形成的料，与水按1:1.2配制而成)，塞好棉塞，在25°C下培养7 10天，直至培养基上出现白色粒状菌丝团，将菌丝团勾出，接入PDA培养基上(PDA培养基由马铃薯200g/L，葡萄糖20g/L，琼脂18g/L配制而成)，置于23 25°C的恒温箱内培养10天；
第四步是对优良的银耳纯白菌丝特征进行判断，其判断标准是菌丝颜色为白色、淡黄色或黄色；气生菌丝直立或斜立平贴于培养基表面，基内菌丝生于培养基里面，其菌丝直径为I. 5 3微米，有横膈膜，部分菌丝体有明显的锁状连合；
第五步是银耳纯白菌丝的提取通过观察，依据第四步的判断标准，选择菌丝走势良好，爬壁力强，舒展雄壮的菌丝作为银耳纯白菌丝；
2、香灰菌丝的提取
第一步是分离材料的选取在袋栽培养基深层，取一小点含有菌丝体的木屑；
第二步是培养将分离材料接种至PDA培养基上，在23 26°C条件下培养3 4天，接种块边缘长出白色粗状的菌丝，菌丝体颜色由白色转为黄绿色，随着菌丝的生长，分泌出黑色素，促使培养基颜色逐渐变黑并不断加深；
第三步是对优良的香灰菌丝特征进行判断，其判断标准是菌丝白色、羽毛状，气生菌丝呈灰白色、细绒状，有时有碳质的黑疤；分生孢子梗呈扫帚状，分生孢子为黄绿色至草绿色，近椭圆形，直径3 5微米；
第四步是香灰菌丝的提取通过观察，依据第三步的判断标准，选择长势旺、爬壁力强 的羽毛状菌丝，采取先端分离法，将菌丝体挑出来，并经过数次移植，获得羽毛状香灰菌丝；
3、两种菌丝交合培养成母种银耳纯白菌和香灰菌交合比例为千分之一，采用斜面试管交合培育法，把银耳纯白菌丝接入试管培养基的中央，挑取少许香灰菌丝，接于离银耳纯白菌丝I 2厘米部位，二者交合后，香灰菌丝呈黑色且布满试管内全部培养基，而银耳纯白菌丝的接种块上出现黄红色水珠。
此方法由于银耳纯白菌丝与香灰菌丝交合比例适当，有早期发育快的特点，香灰菌丝前期长势好，能赶在氨味产生前就强壮发育，保证了菌种的高产、高抵抗力以及菌种的稳定性；且结合菌丝体特征的判断来确定提取的银耳纯白菌丝和香灰菌丝的优良性状，保证了银耳菌种制备的高重复性。
